How Multi-Step versus One-Step Preparation Method Affects the Physicochemical Properties and Transfection Efficiency of DNA/DODAB:MO Lipoplexes
Notice bibliographique
Résumé
The consequences for the transfection efficiencies of different lipoplexes preparation methods, largely remain to be explored, but the knowledge of how different experimental approaches can affect the physicochemical properties and transfection efficiency is essential for a proper tailoring of transfection complexes to particular applications. Therefore, the influence of the number of mixing steps (one-step addition versus multi-step addition of liposomes to plasmid DNA (pDNA)) and lipoplex incubation temperature on the final physicochemical properties and transfection efficiency of pDNA/ Dioctadecyldimethylammonium Bromide (DODAB):1-monooleoyl-rac-glycerol (MO) complexes was studied in three distinct DODAB:MO molar ratios: 4:1, 2:1 and 1:1. Dynamic Light Scattering (DLS), Zeta (ζ) Potential, Ethidium Bromide (EtBr) exclusion assays were used to assess the formation, structure and destabilization of the lipoplexes, whereas in vitro transfection assays with pSV-β-gal plasmid DNA were performed to evaluate their transfection efficiency on the 293T mammalian cell line. Results indicate that the morphology of pDNA/DODAB:MO complexes is dependent on the lipoplex preparation method, resulting in particles of distinct size, surface charge and membrane fluidity. These variations are visible during the complexation dynamics of pDNA and continue throughout the profile of pDNA release from pDNA/DODAB:MO lipoplexes upon incubation with Heparin (HEP), as well as in the in vitro transfection assays. The stepwise addition of DODAB:MO vesicles to pDNA decreases the transfection efficiency of the lipoplexes, while the effect of the lipoplex preparation methods is dependent on the MO content.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».