327. Muscle Specific and Efficient Transgene Expression Using the Fast and Slow Troponin I Promoters in Cell Culture
Notice bibliographique
Résumé
Gene replacement therapy for muscular diseases, such as Duchenne muscular dystrophy, using viral vectors requires strong promoters with the ability to confer muscle specific expression of the therapeutic gene product. Because skeletal muscle consists of a mixture of slow and fast muscle fibers, an ideal promoter for such application should direct efficient expression in both muscle fiber types. The genetic elements regulating expression of the fast and slow isoforms of troponin I (TnI), an abundant muscle protein, are relatively well characterized. Theoretically, a combination of vectors expressing transgenes regulated by TnIfast and TnIslow enhancers/promoters could be used to deliver strong and muscle specific transgene expression in every skeletal muscle fiber of the body. To evaluate the usefulness of the TnIfast and TnIslow enhancers/promoters for gene therapy, we have compared their strengths with the cytomegalovirus (CMV) and with the short (1.3-kb) murine muscle creatine kinase (MCK) promoters in cell culture. Plasmids expressing β-galactosidase (β-gal) regulated by MCK, CMV or TnIfast/TnIslow enhancers/promoters were constructed. The TnIfast construct includes the minimal promoter (200-bp) of the quail TnIfast gene linked to three copies (150-bp each) of that gene’s first-intron enhancer element (IRE). The TnIslow construct includes the minimal promoter (100-bp) of the human TnIslow gene linked to that gene’s upstream enhancer element of 160-bp (USE). Except for MCK, a small intron (100-bp) derived from SV40 was inserted between the promoter and β-bal. 293A cells and C2C12 myoblasts were transfected with the different constructs and β-gal expression was compared 48 hrs later. Analyses were also performed in culture of C2C12 myotubes 10 days after serum withdrawal. In 293 cells, MCK-, TnIfast-, and TnIslow-driven expression was at least 1300 folds weaker than CMV. In non-differentiated myoblasts, TnIslow-driven expression was 3.5 and 15 times better than TnIfast- and MCK-driven expression, respectively. Both TnIfast and TnIslow enhancers/promoters provided high-level β- gal expression in myotubes (35-40 % of CMV, and at least 10 times stronger than MCK). Our data confirmed the excellent muscle specificity and strength of TnIfast and TnIslow enhancer/promoter elements. Their relative small size makes them very attractive for usage in vectors with limited insert capacity such as AAV. These excellent properties warrant further in vivo gene transfer studies using viral vectors.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».