Novel Topology in C-terminal Region of the Human Plasma Membrane Anion Exchanger, AE1
Notice bibliographique
Résumé
Human AE1 performs electroneutral exchange of Cl(-) for HCO(3)(-) across the erythrocyte membrane. We examined the topology of the AE1 C-terminal region using cysteine-scanning mutagenesis and sulfhydryl-specific chemistry. Eighty individual cysteine residues, introduced into an otherwise cysteine-less mutant between Phe(806) and Cys(885), were expressed by transient transfection of HEK293 cells. Topology of the region was determined by comparing cysteine labeling with the membrane-permeant cysteine-directed reagent biotin maleimide, with or without prior labeling with the membrane-impermeant reagents, bromotrimethylammoniumbimane bromide (qBBr) and lucifer yellow iodoacetamide (LYIA). Phe(806)-Leu(835), Ser(852)-Ala(855), and Ile(872)-Cys(885) were labeled by biotin maleimide, suggesting their location in an aqueous environment. In contrast, Phe(836)-Lys(851) and Ser(856)-Arg(871) were not labeled by biotin maleimide and therefore localize to the plane of the bilayer, as transmembrane segments (TM). Labeling by qBBr revealed that Pro(815)-Lys(829) and Ser(852)-Ala(855) are accessible to the extracellular medium. Pro(815)-Lys(829) mutants were also labeled with LYIA. Mutants Ile(872)-Cys(885) were inaccessible to the extracellular medium and thus localized to the intracellular surface of AE1. Functional assays revealed that one face of each of two AE1 TMs was sensitive to mutation. Based on these results, we propose a topology model for the C-terminal region of the membrane domain of human AE1.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».