An optimized whole blood method for flow cytometric measurement of ZAP‐70 protein expression in chronic lymphocytic leukemia
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
BACKGROUND: ZAP-70 protein expression has been proposed as a marker for immunoglobulin heavy chain mutational status, which some studies have correlated with disease course in B-cell chronic lymphocytic leukemia (CLL). Studies published to date measuring levels of expression of ZAP-70 intracellular protein using flow cytometry have demonstrated poor performance, as defined by the difference in signal in known positive and negative lymphocyte populations. METHODS: A recently published method (Chow S, Hedley DW, Grom P, Magari R, Jacobberger JW, Shankey TV, Cytometry A 2005;67:4-17) to measure intracellular phospho-epitopes was optimized using a design of experiments (DOE) approach to provide the best separation of ZAP-70 expression in positive T- or NK-cells as compared to negative B-cells in peripheral blood samples. A number of commercially available anti-ZAP-70 antibody-conjugates were screened using this methodology, and the antibody-conjugate showing the best performance was chosen to develop a four-color, five antibody assays to measure ZAP-70 levels in whole blood specimens. RESULTS: Using the optimized fixation and permeabilization method, improvement in assay performance (signal-to-noise, S/N) was seen in most of the antibodies tested. The custom SBZAP conjugate gave the best S/N when used in conjunction with this optimized fixation /permeabilization method. In conjunction with carefully standardized instrument set-up protocols, we obtained both intra- and interlaboratory reproducibility in the analysis of ZAP-70 expression in whole blood samples from normal and CLL patients. CONCLUSIONS: The development of a sensitive, specific and highly reproducible ZAP-70 assay represents only the first essential step for any clinical assay. The universal implementation of a validated data analysis method and the establishment of methodology-based cutoff points for clinical outcomes must next be established before ZAP-70 protein analysis can be routinely implemented in the clinical laboratory.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,017 | 0,012 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,003 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,005 | 0,010 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle