Subcellular trafficking of antisense oligonucleotides and down-regulation of bcl-2 gene expression in human melanoma cells using a fusogenic liposome delivery system
Notice bibliographique
Résumé
Antisense oligonucleotides (ODN) targeted to specific genes have shown considerable potential as therapeutic agents. The polyanionic charges carried by these molecules, however, present a barrier to efficient cellular uptake and consequently their biological effects on gene regulation are compromised. To overcome this obstacle, a rationally designed carrier system is desirable for antisense delivery. This carrier should assist antisense ODN penetrate the cell membrane and, once inside the cell, then release the ODN and make them available for target binding. We have developed a carrier formulation employing programmable fusogenic vesicles (PFV) as the antisense delivery mediator. This study investigates the intracellular fate of PFV-ODN and bioavailability of antisense ODN to cells. The subcellular distribution of PFV and ODN was examined by monitoring the trafficking of FITC-labeled ODN and rhodamine/phosphatidylethanolamine (Rh-PE)-labeled PFV using confocal microscopy. Fluorescently tagged ODN were first co-localized with the liposomal carrier in the cytoplasm, presumably in endosome/lysosome compartments, shortly after incubation of PFV-ODN with HEK 293 and 518A2 cells. Between 24 and 48 h incubation, however, separation of FITC-ODN from the carrier and subsequent accumulation in the nucleus was observed. In contrast, the Rh-PE label was localized to the cell cytoplasm. The enhanced cellular uptake achieved using the PFV carrier, compared to incubation of free ODN with cells, and subsequent release of ODN from the carrier resulted in significant down-regulation of mRNA expression. Specifically, G3139, an antisense construct targeting the apoptotic antagonist gene bcl-2, was examined in the human melanoma cell line 518A2. Upon exposure to PFV-encapsulated G3139, cells displayed a time-dependent reduction in bcl-2 message levels. The bcl-2 mRNA level was reduced by 50% after 24 h treatment and by approximately 80% after 72 h when compared to cells treated with free G3139, empty PFV or PFV-G3622, a control ODN sequence. Our results establish that ODN can be released from PFV after intracellular uptake and can then migrate to the nucleus and selectively down-regulate target mRNA.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».