Small expression tags enhance bacterial expression of the first three transmembrane segments of the apelin receptor
Notice bibliographique
Résumé
G-protein coupled receptors (GPCRs) are inherently dynamic membrane protein modulators of various important cellular signaling cascades. The apelin receptor (AR or APJ) is a class A GPCR involved in numerous physiological processes, implicated in angiogenesis during tumour formation and as a CD4 co-receptor for entry of human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) to cells. Due to the lack of efficient methods to produce full-length GPCRs enriched with nuclear magnetic resonance (NMR) active (15)N, (13)C, and (or) (2)H isotopes, small GPCR fragments typically comprising 1-2 transmembrane segments are frequently studied using NMR spectroscopy. Here, we report successful overexpression of transmembrane segments 1-3 of AR (AR_TM1-3) in the C41(DE3) strain of Escherichia coli using an AT-rich gene tag previously reported to enhance cell-free expression yields. The resulting protein, with 6 additional N-terminal residues due to the expression tag, was purified using high-performance liquid chromatography (HPLC). Far UV circular dichroism spectropolarimetry demonstrates that AR_TM1-3 has the predicted ~40% α-helical character in membrane-mimetic environments. (1)H-(15)N HSQC NMR experiments imply amenability to high-resolution NMR structural characterization and stability in solution for weeks. Notably, this small expression tag approach may also be generally applicable to other membrane proteins that are difficult to express in E. coli.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».