Rapid purification of recombinant listeriolysin O (LLO) from Escherichia coli
Notice bibliographique
Résumé
Listeria monocytogenes is an emerging foodborne pathogen that is responsible for about 28% of the food-related deaths in the United States. It causes meningitis, septicaemia and in pregnant women, abortions and stillbirths. It secretes the toxin listeriolysin O (LLO) that allows the bacteria to enter the cytoplasm of host cells, where they can replicate and cause further infection. The rapid and sensitive detection of LLO in food samples is a key to monitoring and prevention of listeriosis. To facilitate the development of an assay for the specific detection of LLO, a source of LLO is essential. We outline a method of producing a large amount of functional LLO by expressing the hlyA gene (encoding LLO) in Escherichia coli and purifying the recombinant LLO using a one-step purification method. Purification of the protein takes only about 4 h. We compared three different expression constructs for the production of the toxin, which tends to interact strongly with a number of column surfaces. The first construct, using an intein fusion system, could not be purified from the column. The second LLO construct contained an N-terminus His tag; it gave a yield of 3.5-8 mg l(-1). The third contained a C-terminus His tag; it gave a yield of 2.5 mg l(-1) LLO. The purified LLO from the latter two constructs retained its activity at 4 degrees C for over a year as determined by bovine red blood cell hemolysis assay. This paper provides a much-needed, high-yield, one-step purification method of recombinant LLO, and is the first to provide evidence of long-term stability of the toxin for further applications.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».