The Proline-rich Domain of Dynamin-2 Is Responsible for Dynamin-dependent in Vitro Potentiation of Endothelial Nitric-oxide Synthase Activity via Selective Effects on Reductase Domain Function
Notice bibliographique
Résumé
The GTPase dynamin-2 (dyn-2) binds and positively regulates the nitric oxide-generating enzyme, endothelial nitric-oxide synthase (eNOS) (Cao, S., Yao, Y., McCabe, T., Yao, Q., Katusic, Z., Sessa, W., and Shah, V. (2001) J. Biol. Chem. 276, 14249-14256). Here we demonstrate, using purified proteins, that this occurs through a selective influence of the dyn-2 proline-rich domain (dyn-2 PRD) on the eNOS reductase domain. In vitro studies demonstrate that dyn-2 PRD fused with glutathione S-transferase (GST) binds recombinant eNOS protein specifically and with binding kinetics comparable with that observed between dyn-2 full-length and eNOS. Additionally, GST-dyn-2 PRD binds the in vitro transcribed (35)S-eNOS reductase domain but not the (35)S-eNOS oxygenase domain. Furthermore GST-dyn-2 PRD binds a (35)S-labeled eNOS reductase domain fragment (amino acids 645-850) that partially overlaps with the FAD binding domain of eNOS. A recombinant form of the SH3-containing protein Fyn competes the binding of recombinant eNOS protein with dyn-2 PRD, thereby implicating the SH3-like region contained within this reductase domain fragment as the dyn-2 binding region. Mammalian two-hybrid screen corroborates these interactions in cells as well. Functional studies demonstrate that dyn-2 PRD selectively potentiates eNOS activity in a concentration-dependent manner in an order of magnitude similar to that observed with dyn-2 full-length and in a manner that requires calmodulin. Although dyn-2 PRD does not influence eNOS oxygenase domain function or ferricyanide reduction, it does potentiate the ability of recombinant eNOS to reduce cytochrome c, supporting an influence of dyn-2 PRD on electron transfer between FAD and FMN. (These data indicate that the binding domains of dyn-2 and eNOS reside within the dyn-2 PRD domain and the FAD binding region of the eNOS reductase domains, respectively, and that dyn-2 PRD is sufficient to mediate dyn-2-dependent potentiation of eNOS activity, at least in part, by potentiating electron transfer.)
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,003 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».