Purification and Characterization of Norcoclaurine Synthase
Pourquoi ce travail est dans la base
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Notice bibliographique
Résumé
Norcoclaurine synthase (NCS; EC ) catalyzes the condensation of dopamine and 4-hydroxyphenylacetaldehyde (4-HPAA) as the first committed step in benzylisoquinoline alkaloid biosynthesis in plants. NCS was purified 1590-fold to homogeneity from cell suspension cultures of meadow rue (Thalictrum flavum ssp. glaucum). The purification procedure, which resulted in a 4.2% yield, involved hydrophobic interaction, anion exchange, hydroxyapatite, and gel filtration chromatography. Purified NCS displayed native and denatured molecular masses of approximately 28 and 15 kDa, respectively, suggesting that the enzyme is composed of two subunits. Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis revealed two major and two minor isoforms with pI values between 5.5 and 6.2. NCS activity was maximal at pH 6.5 to 7.0 and temperatures between 42 and 55 degrees C and was not affected by divalent cations. The enzyme showed hyperbolic saturation kinetics for 4-HPAA (K(m) = 335 microm) but sigmoidal saturation kinetics for dopamine (Hill coefficient = 1.8) suggesting cooperativity between the dopamine binding sites on each subunit; thus, NCS might play a regulatory, or rate-limiting, role in controlling the rate of pathway flux in benzylisoquinoline alkaloid biosynthesis. Product inhibition kinetics performed at saturating levels of one substrate and with norlaudanosoline as the inhibitor showed that NCS follows an iso-ordered bi-uni mechanism with 4-HPAA binding before dopamine. NCS activity was highest in soluble protein extracts from roots followed by stems, leaves, and flower buds.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle