Crystallization Characteristics of Calmodulin in Complex and Fused with Calcineurin Peptide
Notice bibliographique
Résumé
Calcineurin (CN) is the only serine/threonine protein phosphatase under the control of Ca 2+ /calmodulin (CaM). CaM up-regulates the phosphatase activity of CN by binding to CaM-binding domain (CBD) of calcineurin subunit A. However, the disordered structure of CBD has not been resolved in all crystal structures of CN determined so far. To gain insight into the structural basis by which CaM binds to CBD of CN and exerts its interaction, we have created a fusion construction in which CBD is covalently linked to CaM via a 5-glycine flexible linker and solved the crystal structure. However, the structure that displays a novel CaM binding conformation is still debatable because of the linker between CaM and CBD and/or crystallization conditions, which may affect protein packing. To investigate whether or not the novel CaM–CBD structure could potentially represent an artifact, we have attempted cocrystallization of CaM in complex with CBD and have now obtained cocrystals in two crystal forms. Comparison of crystallization conditions, crystal morphologies, and crystal parameters indicated that both CaM in complex with CBD peptide and CaM–CBD peptide chimera have the same crystal characteristics and behaviors in crystal growth under the similar crystallization conditions. The results provide direct evidence that the glycine linker did not affect the protein structure and the crystallization conditions did not result in different conformations. The advantage of using the fusion construct includes a higher yield of the CBD peptide driven by robust expression of CaM and the ease to purify both components simultaneously.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».