Laser Confocal Scanning Microscopy and Transmission Electron Microscopy to Visualize the Site of Callose Fiber Elongation on a Single Conifer Protoplast Selected With a Micromanipulator
Notice bibliographique
Résumé
We have developed a new method to observe the site of big and long spiral callose fiber elongation from a protoplast in liquid culture medium. Protoplasts of embryogenic cells of a conifer, Larix leptolepis, were cultured in the NH4NO3-free Murashige and Skoog’s medium containing 50 mM MgCl2 and 6% sucrose in a well in a 96- or 24-well culture plates. The protoplasts with elongated callose fibers were selected before fixation with glutaraldehyde, by picking up using a micromanipulator after electric treatment (DC 3 kV/cm) in the medium containing Alexafluor 488 phalloidin. Under laser confocal scanning microscopy (LCSM), two sites in the cell were stained clearly. One site was the nucleus and the other was the plasma membrane from which fibers elongated. Single cell transmission electron microscopy (TEM) was developed for observation of the microstructure at the site of fiber elongation on a single protoplast. A single protoplast which had a fiber was selected using a micromanipulator and transferred to an agarose bead at a low gelling temperature. The cells were fixed with cold glutaraldehyde and processed for TEM analysis. Elongated thin fibrils with vesicle-like structures could be observed by TEM.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».