Structure−Function Analysis of Human Triacylglycerol Hydrolase by Site-Directed Mutagenesis: Identification of the Catalytic Triad and a Glycosylation Site
Notice bibliographique
Résumé
Triacylglycerol hydrolase is a microsomal enzyme that hydrolyzes stored cytoplasmic triacylglycerol in the liver and participates in the lipolysis/re-esterification cycle during the assembly of very-low-density lipoproteins. The structure-activity relationship of the enzyme was investigated by site-directed mutagenesis and heterologous expression. Expression of human TGH in Escherichia coli yields a protein without enzymatic activity, which suggests that posttranslational processing is necessary for the catalytic activity. Expression in baculovirus-infected Sf-9 cells resulted in correct processing of the N-terminal signal sequence and yielded a catalytically active enzyme. A putative catalytic triad consisting of a nucleophilic serine (S221), glutamic acid (E354), and histidine (H468) was identified. Site-directed mutagenesis of the residues (S221A, E354A, and H468A) yielded a catalytically inactive enzyme. CD spectra of purified mutant proteins were very similar to that of the wild-type enzyme, which suggests that the mutations did not affect folding. Human TGH was glycosylated in the insect cells. Mutagenesis of the putative N-glycosylation site (N79A) yielded an active nonglycosylated enzyme. Deletion of the putative C-terminal endoplasmic reticulum retrieval signal (HIEL) did not result in secretion of the mutant protein. A model of human TGH structure suggested a lipase alpha/beta hydrolase fold with a buried active site and two disulfide bridges (C87-C116 and C274-C285).
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».