4-(4-(Dimethylamino)phenyl)-1-methylpyridinium (APP+) Is a Fluorescent Substrate for the Human Serotonin Transporter
Notice bibliographique
Résumé
Monoamine transporters terminate synaptic neurotransmission and are molecular targets for antidepressants and psychostimulants. Fluorescent reporters can monitor real-time transport and are amenable for high-throughput screening. However, until now, their use has mostly been successful to study the catecholamine transporters but not the serotonin (5HT) transporter. Here, we use fluorescence microscopy, electrophysiology, pharmacology, and molecular modeling to compare fluorescent analogs of 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP(+)) as reporters for the human serotonin transporter (hSERT) in single cells. The fluorescent substrate 4-(4-(dimethylamino)phenyl)-1-methylpyridinium (APP(+)) exhibits superior fluorescence uptake in hSERT-expressing HEK293 cells than other MPP(+) analogs tested. APP(+) uptake is Na(+)- and Cl(-)-dependent, displaced by 5HT, and inhibited by fluoxetine, suggesting APP(+) specifically monitors hSERT activity. ASP(+), which was previously used to study catecholamine transporters, is 10 times less potent than APP(+) at inhibiting 5HT uptake and has minimal hSERT-mediated uptake. Furthermore, in hSERT-expressing oocytes voltage-clamped to -60 mV, APP(+) induced fluoxetine-sensitive hSERT-mediated inward currents, indicating APP(+) is a substrate, whereas ASP(+) induced hSERT-mediated outward currents and counteracted 5HT-induced hSERT currents, indicating ASP(+) possesses activity as an inhibitor. Extra-precise ligand receptor docking of APP(+) and ASP(+) in an hSERT homology model showed both ASP(+) and APP(+) docked favorably within the active region; accordingly, comparable concentrations are required to elicit their opposite electrophysiological responses. We conclude APP(+) is better suited than ASP(+) to study hSERT transport fluorometrically.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».