Universal Genetic Assay for Engineering Extracellular Protein Expression
Notice bibliographique
Résumé
A variety of strategies now exist for the extracellular expression of recombinant proteins using laboratory strains of Escherichia coli . However, secreted proteins often accumulate in the culture medium at levels that are too low to be practically useful for most synthetic biology and metabolic engineering applications. The situation is compounded by the lack of generalized screening tools for optimizing the secretion process. To address this challenge, we developed a genetic approach for studying and engineering protein-secretion pathways in E. coli . Using the YebF pathway as a model, we demonstrate that direct fluorescent labeling of tetracysteine-motif-tagged secretory proteins with the biarsenical compound FlAsH is possible in situ without the need to recover the cell-free supernatant. High-throughput screening of a bacterial strain library yielded superior YebF expression hosts capable of secreting higher titers of YebF and YebF-fusion proteins into the culture medium. We also show that the method can be easily extended to other secretory pathways, including type II and type III secretion, directly in E. coli . Thus, our FlAsH-tetracysteine-based genetic assay provides a convenient, high-throughput tool that can be applied generally to diverse secretory pathways. This platform should help to shed light on poorly understood aspects of these processes as well as to further assist in the construction of engineered E. coli strains for efficient secretory-protein production.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».