Fluorescent dyes alter intracellular targeting and function of cell‐penetrating tetrapeptides
Notice bibliographique
Résumé
Fluorescent labels are commonly used to investigate the mechanisms of cellular uptake and intracellular distribution of cell-penetrating peptides. However, labels such as fluorescein and rhodamine are relatively large and very lipophilic and may significantly alter physicochemical properties of small peptides. To minimize the impact of the fluorescent probe on a tetrapeptide, we substituted one of the amino acids (Lys4) in a tetrapeptide ([Dmt1]DALDA, Dmt-D-Arg-Phe-Lys-NH2 where Dmt = 2',6'-dimethyltyrosine) with two different fluorescent amino acids (beta-dansyl-L-alpha,beta-diaminopropionic acid (dnsDap4) or beta-anthraniloyl-L-alpha,beta-diaminopropionic acid (atnDap4)). Initial studies with confocal laser scanning microscopy (CLSM) showed very different localization patterns for the two fluorescent analogs, with [Dmt1,atnDap4]DALDA showing mitochondrial localization and [Dmt1,dnsDap4]DALDA showing diffuse cytoplasmic localization. Studies with isolated mouse liver mitochondria suggested that [Dmt1,dnsDap4]DALDA targeted the mitochondrial matrix resulting in mitochondrial depolarization, opening of the permeability transition pore, mitochondrial swelling, and rapid release of the peptide into the cytoplasm. In contrast, [Dmt1,atnDap4]DALDA was retained in the inner mitochondrial membrane and did not induce mitochondrial swelling. Furthermore, [Dmt1,atnDap4]DALDA protected mitochondria against Ca2+-induced swelling. Importantly, the unlabeled parent peptide [Dmt1]DALDA behaved like [Dmt1,atnDap4]DALDA and was mitoprotective. These findings suggest that experimental results obtained with fluorescent labels must be interpreted with caution, and the use of multiple fluorophores, together with confirmation using the original or radiolabeled molecule, is recommended.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».