Symmetric Behavior of Hemoglobin α- and β- Subunits during Acid-Induced Denaturation Observed by Electrospray Mass Spectrometry
Notice bibliographique
Résumé
This work employs electrospray mass spectrometry (ESI-MS) and UV-vis spectroscopy for monitoring the mechanism of acid-induced hemoglobin (Hb) denaturation. The protein for these experiments has been freshly prepared from bovine blood. All three Hb derivatives studied (oxyHb, metHb, and cyanometHb) respond to gradual changes from pH 6.8 to 2.1 in a manner that can be described by a stepwise sequential unfolding mechanism: (alphahbetah)2 --> 2 alphahbetah --> 2 alphahfolded + 2 betahfolded --> 2 alphaaunfolded + 2 betaaunfolded + 4 heme (superscripts "h" and "a" refer to holo- and apo-forms, respectively). The results obtained on these freshly prepared samples are significantly different from those of similar experiments previously conducted on metHb obtained commercially as lyophilized powder. Those earlier experiments suggested a highly asymmetric behavior of the two globin chains, involving a heme-deficient dimer (alphahbetaa) as a mechanistically important intermediate on the (dis)assembly pathway. Importantly, heme-deficient dimers are virtually undetectable for the freshly prepared Hb derivatives studied herein at any pH. This apparent discrepancy is attributed to the occurrence of oxidative modifications in the commercial protein. Liquid chromatography and tandem mass spectrometry reveal significant levels of sulfoxide formation for all four methionine residues in commercially obtained metHb. The extent of these modifications for freshly prepared protein is lower by at least a factor of 10. It is concluded that the acid-induced denaturation of Hb follows a highly symmetric mechanism. The occurrence of other mechanisms (possibly involving asymmetric elements) under different solvent conditions cannot be ruled out.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».