An Improved Quantitative Approach for the Assessment of Mitochondrial Fragmentation in Chemoresistant Ovarian Cancer Cells
Notice bibliographique
Résumé
Mitochondrial fission is a process that involves cleavage of mitochondria into smaller fragments and is regulated by the GTPase Dynamin-related protein 1 (Drp1). Higher levels of mitochondrial fission are associated with the induction of apoptosis in cancer cells. However, current methods to accurately quantify mitochondrial fission in order to compare therapeutics that target this process are often ambiguous or rely on subjective assessment. Mitochondria are also prone to aggregation, making accurate analysis difficult. Here we describe an improved approach for the quantification of mitochondrial fragmentation involving several differences from currently existing methods. Cells are first subjected to cytological centrifugation, which reduces cellular z-axis height and disperses individual mitochondria for easier observation. Three commercially available fluorescence analysis tools are then applied to disambiguate remaining mitochondrial clusters that require further inspection. Finally, cut-off scoring is applied, which can be tailored to individual cell type. The resultant approach allows for the efficient and objective assessment of mitochondrial fragmentation in response to treatment. We applied this technique to an experimental question involving chemosensitive and chemoresistant ovarian cancer (OVCA) cells. Cisplatin and the phytochemical piperlongumine were found to induce both mitochondrial fission and apoptosis in chemosensitive cells, while only piperlongumine was able to elicit these cellular responses in chemoresistant cells. Piperlongumine-induced apoptosis appeared to be mediated by Drp1-dependent mitochondrial fission since the apoptotic response was attenuated by the presence of the Drp1 inhibitor mDivi-1. Our study provides groundwork for a more objective approach to the quantification of mitochondrial fragmentation, and sheds further light on a potential mechanism of action for piperlongumine in the treatment of chemoresistant OVCA.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».