A long-lasting, plasmin-activatable thrombin inhibitor aids clot lysis in vitro and does not promote bleeding in vivo
Notice bibliographique
Résumé
The leech protein hirudin is a potent inhibitor of thrombin, but clinical use of recombinant hirudin is restricted by haemorrhagic risks, and complicated by hirudin's rapid clearance from the circulation. We previously employed albumin fusion to slow hirudin variant 3 (HV3) clearance. In this study, we hypothesized that reconfiguration of the chimera, appending human serum albumin (HSA) to the N-terminus of HV3, with an intervening plasmin cleavage site, would create a slowly cleared, plasmin-activatable HV3. Potential plasmin cleavage sites were screened by expression in Escherichia coli, interposed between glutathione sulfotransferase and HV3 domains. The most reactive sequence (GSGIYR-ITY) was recreated in C-terminally His-tagged albumin fusion protein HSACHV3, expressed in Pichia pastoris yeast and purified by nickel-chelate affinity chromatography. HSACHV3 showed no thrombin inhibitory activity in the absence of plasmin, but liberated active HV3 in a time- and concentration-dependent manner in its presence. In a discontinuous clot assay involving clot-bound thrombin, HSACHV3 assisted clot lysis by limiting clot extension in a tPA- and concentration-dependent manner. Similar results were obtained in plasma at higher concentrations of HSACHV3. The chimeric protein exhibited much slower clearance in mice than unfused HV3, and indistinguishable pharmacokinetics from unfused recombinant HSA. In a mouse tail transection bleeding model, doses of HSACHV3 identical to those of HV3 that elicited a four-fold increase in the volume of shed blood were without effect. Our results suggest that HSACHV3 is a fully latent, plasmin activatable, long-lasting hirudin, of potential benefit in thrombotic disorders resistant to natural or pharmacological clot lysis.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».