About making a CHO production cell line “research-friendly” by genetic engineering
Notice bibliographique
Résumé
The use of Chinese Hamster Ovary (CHO) cells for transient gene expression is gaining importance steadily, as it has been shown that both quality and quantity of proteins derived from CHO cells differs from and can even be superior to material derived from Human Embryonic Kidney (HEK293) cells [1][2][3][4].In order to augment yields HEK cell lines have been genetically modified, by e.g.stable integration of an expression cassette coding for the Epstein-Barr Virus Nuclear Antigen 1 (EBNA1) in conjunction with expression plasmid vectors containing the EBNA1 interaction site oriP.Here we describe the generation of a CHO cell line stably expressing the EBNA1 gene to enhance yields after large scale transient transfection with polyethylenimine (PEI).An expression plasmid featuring the EBNA1 gene was transfected into an in-house available CHO wild type cell line by nucleofection and several stable pools were established by antibiotic selection.In a first approach, 133 clones were then isolated by limiting dilution cloning and subsequently expanded for further analysis.The approach aimed at identifying clones showing both the presence of EBNA1 protein and enhanced yields after PEI-mediated transient expression of a reporter protein at the same time.Cell lysates or nuclear and cytoplasmic protein extracts from these clones were tested for presence of EBNA1 protein by Western Blot.An in-licensed cell line, CHO EBNALT85 (Icosagen AS, Tartu, Estonia) expressing the full length EBNA1 gene, and the HEK293-6E cell line (from the group of Y. Durocher, NRC, Canada) expressing a truncated EBNA1 gene served as positive controls.A number of commercially available anti-EBNA1 antibodies were tested in Western blotting, but most antibodies failed to detect the EBNA1 protein produced by these positive control cells.Only
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».