Fast and slow voltage sensor rearrangements during activation gating in Kv1.2 channels detected using tetramethylrhodamine fluorescence
Notice bibliographique
Résumé
The Kv1.2 channel, with its high resolution crystal structure, provides an ideal model for investigating conformational changes associated with channel gating, and fluorescent probes attached at the extracellular end of S4 are a powerful way to gain a more complete understanding of the voltage-dependent activity of these dynamic proteins. Tetramethylrhodamine-5-maleimide (TMRM) attached at A291C reports two distinct rearrangements of the voltage sensor domains, and a comparative fluorescence scan of the S4 and S3-S4 linker residues in Shaker and Kv1.2 shows important differences in their emission at other homologous residues. Kv1.2 shows a rapid decrease in A291C emission with a time constant of 1.5 +/- 0.1 ms at 60 mV (n = 11) that correlates with gating currents and reports on translocation of the S4 and S3-S4 linker. However, unlike any Kv channel studied to date, this fast component is dwarfed by a larger, slower quenching of TMRM emission during depolarizations between -120 and -50 mV (tau = 21.4 +/- 2.1 ms at 60 mV, V(1/2) of -73.9 +/- 1.4 mV) that is not seen in either Shaker or Kv1.5 and that comprises >60% of the total signal at all activating potentials. The slow fluorescence relaxes after repolarization in a voltage-dependent manner that matches the time course of Kv1.2 ionic current deactivation. Fluorophores placed directly in S1 and S2 at I187 and T219 recapitulate the time course and voltage dependence of slow quenching. The slow component is lost when the extracellular S1-S2 linker of Kv1.2 is replaced with that of Kv1.5 or Shaker, suggesting that it arises from a continuous internal rearrangement within the voltage sensor, initiated at negative potentials but prevalent throughout the activation process, and which must be reversed for the channel to close.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».