<i>In Situ</i> Electroporation of Radioactive Compounds Into Adherent Cells
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
We previously developed a technique, termed in situ electroporation, where nonpermeant molecules are introduced through an electrical pulse into adherent cells, while they grow on electrically conductive, optically transparent, indium-tin oxide (ITO). Careful control of the electric field intensity results in essentially 100% of the cells taking up the introduced material, without any detectable effect upon the physiology of the cell, presumably because the pores reseal rapidly so that the cellular interior is restored to its original state. Electroporation of radioactive material is faced with two important considerations: (1) potential for exposure of personnel to irradiation, and (2) the requirement for electroporation of a large number of cells. In this report, we describe a modification in the geometry of the slides and electrodes which permits the use of inexpensive ITO-coated glass of lower conductivity that can be discarded after use, to electroporate large numbers of cells using a minimum volume of radioactive nucleotide solution. The results demonstrate that, using this assembly, the determination of the Ras-bound GTP/GTP+GDP ratios through electroporation of [alpha32P]GTP can be conducted using approximately five times lower amounts of isotope than in previous designs. Moreover, this assembly permits efficient upscaling, which makes the determination of Ras-GTP binding in cells which are deficient in Ras activity possible. In addition, we demonstrate the labeling of two viral phosphoproteins--the Simian Virus 40 Large Tumor antigen, and Adenovirus E1A--through [gamma32P]ATP electroporation using this setup. In both cases, electroporation of the nucleotide can achieve a great increase in the efficiency and specificity of labeling compared to the addition of [32P]-orthophosphate to the culture medium, presumably because the immediate phosphate donor nucleotide itself is introduced, which can directly bind to the target proteins.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle