Clonal stability of <i>Pasteurella multocida</i> in free-range layers affected by fowl cholera

Detailed longitudinal studies of the genetic stability of Pasteurella multocida ssp. multocida, the cause of fowl cholera, have not previously been carried out. Consequently, the aim of the present study was to provide detailed information on the genetic stability and diversity of P. multocida ssp. multocida in poultry flocks over time, enabling new insights into the molecular epidemiology of this important poultry pathogen. Longitudinal investigations of the rate and causes of mortality were carried out on two free-range layer farms (A and B) over a period of 11 months. The total mortality of two flocks, A1 and A2, on farm A were 62 and 91%, respectively, while the total mortality of a single flock B1 on farm B was 6%. Postmortem examinations were performed on 708 layers from flocks A1 and A2 and in 159 from flock B1. Fowl cholera was the main cause of mortality on both farms. Pasteurella multocida isolates recovered from layers on both farms were characterized phenotypically and genotypically, and 322 isolates were identified as P. multocida ssp. multocida. The genetic diversity of 99 isolates from farm A and 31 from farm B was characterized by restriction endonuclease analysis and amplified fragment length polymorphism analysis. The isolates on each farm had a unique restriction endonuclease analysis and amplified fragment length polymorphism analysis type, suggesting a single introduction of a successful clone. Furthermore the clone on farm A was identical to clones previously isolated from outbreaks in the avifauna of Denmark in 1996 and 2001 and in Sweden in 1998. This study provides convincing evidence for the clonal stability of outbreak clones of P. multocida. Stabilité clonale de Pasteurella multocida chez des poules pondeuses élevées en plein air affectées par le choléra aviaire Jusqu'à présent, des études longitudinales et détaillées de la stabilité génétique de Pasteurella multocida ssp. multocida, l'agent responsable du choléra, n'avaient été réalisées. En conséquence, le but de cette étude a été de fournir des informations détaillées sur la stabilité génétique et la diversité de P. multocida ssp. multocida dans les troupeaux de volailles dans le temps, permettant de fournir de nouveaux aperçus sur l'épidémiologie moléculaire de cet agent pathogène important pour les volailles. Les investigations longitudinales des taux et des causes de mortalité ont été réalisées dans deux élevages de poules pondeuses élevées en plein air (A et B) sur une période de 11 mois. Les mortalités totales de deux troupeaux A1 et A2 appartenant à l'élevage A ont été respectivement 62% et 91%, alors que la mortalité totale du seul troupeau B1 de l'élevage B a été de 6%. Les examens post mortem ont été réalisés sur 708 pondeuses des troupeaux A1 et A2 et sur 159 du troupeau B1. Le choléra aviaire a été la principale cause de mortalité au niveau des deux élevages. Les souches de Pasteurella multocida isolées à partir des pondeuses des deux fermes ont été caractérisées sur les plans phénotypique et génétique et 322 souches ont été identifiées comme P. multocida ssp. multocida. La diversité génétique de 99 souches de l'élevage A et de 31 souches de l'élevage B a été caractérisée par l'analyse de restriction enzymatique (REA) et l'analyse du polymorphisme de taille d'un fragment amplifié (AFLP). Les souches de chaque élevage ont présenté un seul type de REA et AFLP suggérant l'introduction d'un clone unique. De plus, le clone de l'élevage A était identique aux clones isolés précédemment de cas pathologiques de l'avifaune au Danemark en 1996 et en 2001 ainsi qu'en Suède en 1998. Cette étude fournit une évidence convaincante de la stabilité clonale des souches épidémiques de P. multocida. Klonale Stabilität von Pasteurella multocida bei von Gefügelcholera betroffenen Freilandhühnern Bislang sind detaillierte Langzeitstudien zur genetischen Stabilität von Pasteurella multocida ssp. multocida, dem Erreger der Geflügelcholera nicht durchgeführt worden. Somit war das Ziel der vorliegenden Studie, detaillierte Informationen über die genetische Stabilität und Vielfalt von P. multocida ssp. multocida in Geflügelherden über einen langen Zeitraum zu gewinnen und damit neue Einsichten in die molekulare Epidemiologie dieses bedeutsamen Krankheitserregers beim Geflügel zu ermöglichen. In zwei Legehennenauslaufhaltungen (A und B) wurden über einen Zeitraum von 11 Monaten Langzeituntersuchungen zu den Mortalitätsraten und ihren Ursachen durchgeführt. Die Mortalität in den beiden Herden A1 und A2 auf der Farm A betrug insgesamt 62 bzw. 91 %, während in der einen Herde B1 auf der Farm B eine Mortalität von 6 % erreicht wurde. Bei 708 Legehennen aus den Herden A1 und A2 und bei 169 Hennen aus der Herde B1 wurden Sektionen vorgenommen. Auf beiden Farmen war die Geflügelcholera die Haupttodesursache. Pasteurella multocida-Isolate aus Legehennen beider Farmen wurden phänotypisch und genotypisch charakterisiert und 322 Isolate wurden als Pasteurella multocida ssp. multocida identifiziert. Die genetische Diversität von 99 Isolaten aus Farm A und 31 aus Farm B wurde mittels Restriktionsendonukleaseanalyse (REA) und amplifizierter Framentlängenpoly-morphismusanalyse (AFLP) charakterisiert. Die Isolate auf jeder Farm gehörten jeweils zu nur zu einem einzigen REA- und AFLP-Typ, was auf eine einmalige Einschleppung eines erfolgreichen Klons schließen lässt. Außerdem war der Klon von Farm A identisch mit Klonen, die bereits bei Ausbrüchen in Geflügelbeständen 1996 und 2001 in Dänemark und 1998 in Schweden isoliert worden waren. Diese Studie erbringt einen überzeugenden Beweis der klonalen Stabilität von bei Krankheitsausbrüchen isolierten P. multocida-Klonen. Estabilidad de los clones de Pasteurella multocida en ponedoras en extensivo afectadas por cólera aviar Estudios longitudinales detallados de la estabilidad genética de Pasteurella multocida ssp. multocida, agente causal del cólera aviar, no se han desarrollado con anterioridad. Por lo tanto, el objetivo de este estudio fue obtener información detallada en el tiempo de la estabilidad genética y de la diversidad de P. multocida ssp. Multocida en lotes de aves, obteniendo nuevas ideas acerca de la epidemiología molecular de este importante patógeno aviar. Se llevaron a cabo estudios longitudinales del porcentaje y de las causas de mortalidad en dos granjas de ponedoras en extensivo (A y B) durante un período de 11 meses. La mortalidad total en ambos lotes de la granja A, A1 y A2, fue del 62% y del 91% respectivamente, mientras que la mortalidad total del único lote en la granja B, el B1, fue del 6%. Se realizaron estudios postmortem en 708 gallinas ponedoras de los lotes A1 y A2, y 159 del lote B1. El cólera aviar fue la principal causa de mortalidad en ambas granjas. Se caracterizaron fenotípica y genotípicamente aislamientos de Pasteurella multocida obtenidos de ponedoras de ambas granjas, y 322 aislamientos fueron identificados como P. multocida ssp. multocida. Se caracterizó la diversidad genética de 99 aislamientos de la granja A y 31 de la granja B mediante análisis de la restricción con endonucleasas (REA) y análisis del polimorfismo de la longitud de los fragmentos amplificados (AFLP). Los aislamientos de cada granja mostraron patrones característicos de REA y AFLP, sugiriendo una única entrada de un clon exitoso. Además el clon de la granja A era idéntico a clones aislados previamente de brotes en la avifauna de Dinamarca en 1996 y 2001y en Suecia en 1998. Este estudio proporciona evidencias de la estabilidad de los clones causantes de brotes de P. multocida.

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