Immunoassay of Insulin-Like Growth Factor-Binding Protein-3 (IGFBP-3): New Means to Quantifying IGFBP-3 Proteolysis
Notice bibliographique
Résumé
Posttranslational modifications, particularly proteolysis, may play a significant role in the regulation of insulin-like growth factor (IGF)-binding protein-3 (IGFBP-3) physiology, and thus, measurement of modified variants of IGFBP-3 and/or their combination ratios may have important research and diagnostic relevance. Based on evaluation of a panel of monoclonal and polyclonal IGFBP-3 antibodies, we constructed three new enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) using a common capture and polyclonal (ELISA-3) or monoclonal (ELISA-1 and -2) detection antibodies and evaluated them in a two-step colorimetric procedure. Evaluation of ELISA-1-3 demonstrated detection limit, dynamic range, overall precision, and recovery of the added IGFBP-3 to be generally less than 0.04 microg/L, 2-100 microg/L, less than 10%, and 91-113%, respectively. IGF-I and -II, and IGFBP-1, -2, -4, -5, and -6 did not interfere. In normal adult sera (n = 26), seminal plasma (n = 14), pregnancy sera (n = 30), and amniotic fluid (n = 30), ELISA-1-3 detected significantly different IGFBP-3 levels (by up to 6-fold, on the average), whereas levels in seminal plasma determined by ELISA-1 were undetectable. Comparison of the values obtained vs. corresponding levels by an established method (Diagnostic Systems Laboratories, Inc., active IGFBP-3 ELISA) were similarly sample dependent and, on the average, varied by up to 19-fold. Only ELISA-3 compared well with the Diagnostic Systems Laboratories, Inc., IGFBP-3 ELISA when samples from normal adults were analyzed. The observed variability could not be totally explained by 50% lower reactivity of ELISA-1-3 for glycosylated IGFBP-3 vs. the nonglycosylated form, and changes in phosphorylation had no effect on immunoreactivity. Evaluation of IGFBP-3 after proteolysis by seminal plasma, plasmin, or thrombin suggested recognition of intact IGFBP-3 by ELISA-1, whereas ELISA-3 appeared to measure intact and proteolyzed IGFBP-3 (total IGFBP-3) with similar potency. In contrast, levels determined by ELISA-2 increased severalfold, indicating preferential recognition of IGFBP-3 fragments. We propose that immunoassay capable of differential determination of IGFBP-3 variants may help better define the physiological importance and potential clinical value of IGFBP-3 measurements.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».