The Development and Applications of Nonradioactive Plate-Formatted DNA-Binding Assay for Ku70/80, a Multifunctional DNA-Binding Protein Complex
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Notice bibliographique
Résumé
Ku is a heterodimer composed of p70 and p80, and is the regulatory subunit of DNA-dependent protein kinase. As a multifunctional DNA-binding protein complex, Ku plays important roles in DNA damage repair through non-homologous end joining and in V(D)J recombination. In addition, Ku has also been implicated in various biological functions including growth control, cell proliferation, cell cycle, chromosome maintenance, transcriptional regulation, apoptosis, and viral infection. In particular, using our Inverse Genomics (Immusol, Inc., San Diego, CA) platform technology, we recently identified Ku80 as an essential co-factor for human immunodeficiency virus replication. Although Ku has been studied extensively in the past years, its in-depth study as well as development as a drug target has been limited by conventional DNA-binding activity assay. Here we describe the development and applications of a nonradioactive DNA binding assay in the 96-well format. We show that this plate-formatted assay is more sensitive and allows for direct quantification when compared with an electrophoretic mobility shift assay. The establishment of this assay will not only facilitate structure and function studies on Ku, but also help the development of Ku protein or its DNA repair enzyme complex as a drug target.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle