Self‐activating factor X derivative fused to the C‐terminus of a cellulose‐binding module: Production and properties
Notice bibliographique
Résumé
In this work, a new derivative of FX was engineered. It comprises a cellulose-binding module (CBM) fused to the N-terminus of the truncated light chain (E2FX) of FX and a hexahistidine tag (H6) fused to the C-terminus of the heavy chain. The sequence LTR at the site of cleavage of the activation peptide from the N-terminus of the heavy chain is changed to IEGR to render the derivative self-activating. However, N-linked glycans on the CBM of the derivative blocked its binding to cellulose and those on the activation peptide slowed its activation. Therefore, the sites of N-linked glycosylation on the CBM and on the activation peptide were eliminated by mutation. The final derivative can be produced in good yield by cultured mammalian cells. It is purified easily with Ni(2+)-agarose, it is self-activating, and it can be immobilized on cellulose. When immobilized on a column of cellulose beads, the activated derivative retains approximately 80% of its initial activity after 30 days of continuous hydrolysis of a fusion protein substrate. Under these conditions of operation, the effective substrate:enzyme ratio is >10(4).
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».