[P57]: A simple method for directing the differentiation of embryonic stem (ES) cells into functional motoneurones
Notice bibliographique
Résumé
Directing embryonic stem (ES) cells to differentiate into functional motoneurones has proven to be a strong technique for studying neuronal development as well as being a potential source of cells for cell replacement therapies involving spinal cord disorders. Unfortunately, the mitogenic reagents currently used for directed differentiation are not commercially available and thus this technique has not been widely accessible to the scientific community. Here, we present a novel and simple method to derive motoneurones from ES cells using readily attainable reagents. ES cells were derived from a transgenic mouse in which enhanced green fluorescent protein (eGFP) was linked to the Hb9 promoter. Because Hb9 is expressed by motoneurones, eGFP expression was used to screen directed differentiation. ES cells were plated onto a monolayer of HK 293 cells that carry a stably integrated construct for the expression of murine sonic hedgehog (Shh) under ecdysone-inducible control (293 EcR Shh cells; ATCC). To initiate motoneurone differentiation, ES cell/HK 293 cell co-cultures were treated with Ponesterone A (PA) and retinoic acid (RA) for 5 days. PA induces ecdysone and thus drives Shh expression. To assess motoneurone differentiation the treated ES cells were either plated on Matrigel for standard immunocytochemical analysis or myotubes for electrophysiology recordings. A comparative study was also performed using ES cells treated with RA and recombinant human Shh (R&D Systems). ES cells differentiated into eGFP motoneurones that express Lhx3 and Isl1/2 in the co-cultures treated with PA and RA. Very poor motoneurone differentiation was achieved using RA and recombinant human Shh. ES cell derived motoneurones from the ES cell/HK 293 cell co-cultures also formed functional synaptic connections when plated on myotubes. This simple treatment paradigm produces functional motoneurones that can be used for developmental and pre-clinical studies. Support contributed by NSERC, CIHR and NSHRF.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,002 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,003 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,012 | 0,012 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».