<i>De</i> <i>novo</i> helical peptides as target sequences for a specific, fluorogenic proteinlabelling strategy
Pourquoi ce travail est dans la base
Une base qui oublie comment elle a trouvé un travail ne peut pas être vérifiée. Voici les voies qui ont admis celui-ci.
Notice bibliographique
Résumé
New methods are needed to selectively label proteins in a manner that minimally perturbs their structures and functions. We have developed a 'small molecule'-based labelling technique that relies on the use of dimaleimide fluorogens that react with a target peptide sequence that presents appropriately spaced, solvent-exposed Cys residues. The thiol addition reaction between target sequence and dimaleimide fluorogen restores the latent fluorescence of the latter and results in the covalent fluorescent labelling of the protein of interest (J. Guy, K. Caron, S. Dufresne, S. W. Michnick, W. G. Skene and J. W. Keillor, J. Am. Chem. Soc., 2007, 129, 11969-11977). We demonstrated the proof-of-principle of this method previously, using a dicysteine mutant of the helical protein Fos (S. Girouard, M.-H. Houle, A. Grandbois, J. W. Keillor and S. W. Michnick, J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 559-566). Herein, we present the design of a novel peptide sequence presenting two Cys residues separated by two turns of an alpha-helix. The secondary structure of this sequence was confirmed by CD spectroscopy, before and after the fluorescent labelling reaction. A new series of di(3-methylmaleimide) fluorogens was prepared and kinetically evaluated, tuning their reactivity toward the target sequence. Attempts were made to increase the reactivity of the parent target sequence by rational design; however, the introduction of basic His residues in the vicinity of one or more Cys residues did not have the desired effect. Finally, epidermal growth factor receptors bearing the de novo target sequence were specifically labelled with a di(3-methylmaleimide) fluorescein fluorogen, validating our method for specific cell-surface labelling of proteins. A wide variety of fluorogen and peptide designs can be envisioned with potential applications to multiplexed labelling for the study of temporal and spatial dynamics of protein expression.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle