Using 2-Aminopurine Fluorescence To Detect Bacteriophage T4 DNA Polymerase−DNA Complexes That Are Important for Primer Extension and Proofreading Reactions
Notice bibliographique
Résumé
The fluorescence of the base analogue 2-aminopurine (2AP) was used to probe bacteriophage T4 DNA polymerase-induced conformational changes in the template strand produced during the nucleotide incorporation and proofreading reactions. 2AP fluorescence in DNA is quenched by 2AP interactions with neighboring bases, but T4 DNA polymerase binding to DNA substrates labeled with 2AP in the templating position produces large increases in fluorescence intensity. Fluorescence lifetime studies were performed to characterize the fluorescent complexes. Three fluorescence lifetime components were observed for unbound DNA substrates as reported previously, but T4 DNA polymerase binding modulated the amplitudes of these components and created a new, highly fluorescent 10.5 ns component. Experimental evidence for correlation of fluorescence lifetimes with functionally distinct complexes was obtained by forming complexes under different reaction conditions. T4 DNA polymerase complexes were formed with DNA substrates with matched and mismatched primer ends and with A+T- or G+C-rich primer-terminal regions. dTTP was added to binary complexes to form ternary DNA polymerase-DNA-nucleotide complexes. The effect of temperature on complex formation was studied, and complexes were formed with proofreading-defective T4 DNA polymerases. Complexes characterized by the 10.5 ns lifetime were demonstrated to be formed at the crossroads of the primer-extension and proofreading pathways.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».