A highly sensitive CE‐UV method with dynamic coating of silica‐fused capillaries for monitoring of nucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase reactions
Notice bibliographique
Résumé
A new highly sensitive capillary electrophoresis (CE) method applying dynamic coating and on-line stacking for the monitoring of nucleotide pyrophosphatases/phosphodiesterases (NPPs) and the screening of inhibitors was developed. NPP1 and NPP3 are membrane glycoproteins that catalyze the hydrolysis nucleotides, e.g. convert adenosine 5'-triphosphate to adenosine 5'-monophosphate (AMP) and pyrophosphate. Enzymatic reactions were performed and directly subjected to CE analysis. Since the enzymatic activity was low, standard methods were insufficient. The detection of nanomolar AMP and other nucleotides could be achieved by field-enhanced sample injection and the addition of polybrene to the running buffer. The polycationic polymer caused a dynamic coating of the silica-fused capillary, resulting in a reversed electroosmotic flow. The nucleotides migrated in the direction of the electroosmotic flow, whereas the positively charged polybrene molecules moved in the opposite direction, resulting in a narrow sample zone over a long injection time. Using this on-line sensitivity enhancement technique, a more than 70-fold enrichment was achieved for AMP (limit of detection, 46 nM) along with a short migration time (5 min) without compromising separation efficiency and peak shape. The optimized CE conditions were as follows: fused-silica capillary (30 cm effective lengthx75 mum), electrokinetic injection for 60 s, 50 mM phosphate buffer pH 6.5, 0.002% polybrene, constant current of -60 microA, UV detection at 210 nm, uridine 5'-monophosphate as the internal standard. The new method was used to study enzyme kinetics and inhibitors. It opens an easy way to determine the activities of slowly metabolizing enzymes such as NPPs, which are of considerable interest as novel drug targets.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».