Dissociation Kinetics of the Streptavidin–Biotin Interaction Measured Using Direct Electrospray Ionization Mass Spectrometry Analysis
Notice bibliographique
Résumé
Dissociation rate constants (k (off)) for the model high affinity interaction between biotin (B) and the homotetramer of natural core streptavidin (S(4)) were measured at pH 7 and temperatures ranging from 15 to 45 °C using electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS). Two different approaches to data analysis were employed, one based on the initial rate of dissociation of the (S(4) + 4B) complex, the other involving nonlinear fitting of the time-dependent relative abundances of the (S(4) + iB) species. The two methods were found to yield k (off) values that are in good agreement, within a factor of two. The Arrhenius parameters for the dissociation of the biotin-streptavidin interaction in solution were established from the k (off) values determined by ESI-MS and compared with values measured using a radiolabeled biotin assay. Importantly, the dissociation activation energies determined by ESI-MS agree, within 1 kcal mol(-1), with the reported value. In addition to providing a quantitative measure of k (off), the results of the ESI-MS measurements revealed that the apparent cooperative distribution of (S(4) + iB) species observed at short reaction times is of kinetic origin and that sequential binding of B to S(4) occurs in a noncooperative fashion with the four ligand binding sites being kinetically and thermodynamically equivalent and independent.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,003 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».