Probing the Kinetics and Thermodynamics of Copper(II) Binding to<i>Bacillus subtilis</i>Sco, a Protein Involved in the Assembly of the Cu<sub>A</sub>Center of Cytochrome<i>c</i>Oxidase
Notice bibliographique
Résumé
BsSco is a member of the Sco protein family involved in the assembly of the Cu(A) center within cytochrome c oxidase. BsSco forms a complex with Cu(II) that has properties consistent with dithiolate ligation. Stopped-flow UV-visible absorbance and fluorescence coupled with multiwavelength analysis reveal biphasic binding kinetics between BsSco and Cu(II). An initial species appears with absorbance centered at 382 nm at a copper concentration-dependent rate (2.9 x 10(4) M(-1) s(-1)). The initial species decays at a first-order rate (1.5 s(-1)) to the equilibrium form with a maximum at 352 nm. Formation of the BsSco-Cu(II) complex is accompanied by quenching of protein fluorescence. The copper concentration-dependent phase gives 70% of the total quenching, while the final 30% develops during the second phase of the absorbance change. The pH dependence of copper binding shows that the copper-dependent rate increases by 50-fold as the pH decreases from 8.5 to 5.5 with an apparent pK(a) of 6.7. The slower phase rate is independent of pH. Comparison of circular dichroism spectra between apo-BsSco and the BsSco-Cu(II) complex reveals a small change in the UV region consistent with a subtle conformational change upon copper binding. There is formation of a distinctive visible CD spectrum in the BsSco-Cu(II) complex. A model is presented in which the kinetic and thermodynamic stability of the BsSco-Cu(II) complex results from a two-step mechanism. Release of copper would be facilitated in the intermediate form of BsSco, and attaining such a low-Cu(II) affinity state may be important for BsSco's function in Cu(A) assembly.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».