Noncovalent labeling of myoglobin for capillary electrophoresis with laser‐induced fluorescence detection by reconstitution with a fluorescent porphyrin
Notice bibliographique
Résumé
Traditional protein labeling reactions for capillary electrophoresis (CE) with laser-induced fluorescence (LIF) detection suffer from a variety of disadvantages. The reactions can be nonquantitative on a reasonable time scale, require relatively high concentrations of protein and fluorophore, and can give multiple reaction products that can not be separated. Herein, we describe a new noncovalent labeling technique that is rapid, selective for myoglobin, and gives a simple reaction product. Myoglobin is denatured with either 5.4 M urea or low pH (2.0). The denatured myoglobin releases its nonfluorescent heme group. A fluorescent porphyrin (protoporphyrin IX (PPIX) or its zinc (II) complex, Zn-PPIX), is added to the mixture and the solution conditions are altered (dilute to 0.54 M urea or adjust pH to 7.0) to allow myoglobin refolding. Upon refolding, the protein incorporates PPIX from solution, thus making the reaction product fluorescent. The experimental conditions have been optimized for both urea and low-pH denaturation of myoglobin. The latter procedure produces a detection limit of 50 nM. Alternatively, the reaction can be performed without denaturation by a simple exchange of the porphyrins. The use of Zn-PPIX yields the most efficient reaction. The low-pH reaction is unaffected by a 2000-fold excess of bovine serum albumin.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».