Intramolecular Electron Transfer versus Substrate Oxidation in Lactoperoxidase: Investigation of Radical Intermediates by Stopped-Flow Absorption Spectrophotometry and (9−285 GHz) Electron Paramagnetic Resonance Spectroscopy
Notice bibliographique
Résumé
We have combined the information obtained from rapid-scan electronic absorption spectrophotometry and multifrequency (9−295 GHz) electron paramagnetic resonance (EPR) spectroscopy to unequivocally determine the electronic nature of the intermediates in milk lactoperoxidase as a function of pH and to monitor their reactivity with organic substrates selected by their different accessibilities to the heme site. The aim was to address the question of the putative catalytic role of the protein-based radicals. This experimental approach allowed us to discriminate between the protein-based radical intermediates and [Fe(IV)═O] species, as well as to directly detect the oxidation products by EPR. The advantageous resolution of the g anisotropy of the Tyr • EPR spectrum at high fields showed that the tyrosine of the [Fe(IV)═O Tyr • ] intermediate has an electropositive and pH-dependent microenvironment [ g x value of 2.0077(0) at pH ≥ 8.0 and 2.0066(2) at 4.0 ≤ pH ≤ 7.5] possibly related to the radical stability and function. Two types of organic molecules (small aromatic vs bulkier substrates) allowed us to distinguish different mechanisms for substrate oxidation. [Fe(IV)═O Por •+ ] is the oxidizing species of benzohydroxamic acid, o -dianisidine, and o -anisidine via a heme-edge reaction and of mitoxantrone via a long-range electron transfer (favored at pH 8) not involving the tyrosyl radical, the formation of which competed with the substrate oxidation at pH 5. In contrast, the very efficient reaction with ABTS at pH 5 is consistent with [Fe(IV)═O Tyr • ] being the oxidizing species. Accordingly, the identification of the ABTS binding site by X-ray crystallography may be a valuable tool in rational drug design.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».