Metal-Chelating Polymers by Anionic Ring-Opening Polymerization and Their Use in Quantitative Mass Cytometry
Notice bibliographique
Résumé
Metal-chelating polymers (MCPs) are important reagents for multiplexed immunoassays based on mass cytometry. The role of the polymer is to carry multiple copies of individual metal isotopes, typically as lanthanide ions, and to provide a reactive functionality for convenient attachment to a monoclonal antibody (mAb). For this application, the optimum combination of chain length, backbone structure, end group, pendant groups, and synthesis strategy has yet to be determined. Here we describe the synthesis of a new type of MCP based on anionic ring-opening polymerization of an activated cyclopropane (the diallyl ester of 1,1-cyclopropane dicarboxylic acid) using a combination of 2-furanmethanethiol and a phosphazene base as the initiator. This reaction takes place with rigorous control over molecular weight, yielding a polymer with a narrow molecular weight distribution, reactive pendant groups for introducing a metal chelator, and a functional end group with orthogonal reactivity for attaching the polymer to the mAbs. Following the ring-opening polymerization, a two-step transformation introduced diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) chelating groups on each pendant group. The polymers were characterized by NMR, size exclusion chromatography (SEC), and thermogravimetric analysis (TGA). The binding properties toward Gd(3+) as a prototypical lanthanide (Ln) ion were also studied by isothermal titration calorimetry (ITC). Attachment to a mAb involves a Diels-Alder reaction of the terminal furan with a bismaleimide, followed by a Michael addition of a thiol on the mAb, generated by mild reduction of a disulfide bond in the hinge region. Polymer samples with a number average degree of polymerization of 35, with a binding capacity of 49.5 ± 6 Ln(3+) ions per chain, were loaded with 10 different types of Ln ions and conjugated to 10 different mAbs. A suite of metal-tagged Abs was tested by mass cytometry in a 10-plex single cell analysis of human adult peripheral blood, allowing us to quantify the antibody binding capacity of 10 different cell surface antigens associated with specific cell types.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».