A Digital Microfluidic Approach to Homogeneous Enzyme Assays
Notice bibliographique
Résumé
A digital microfluidic device was applied to a variety of enzymatic analyses. The digital approach to microfluidics manipulates samples and reagents in the form of discrete droplets, as opposed to the streams of fluid used in channel microfluidics. This approach is more easily reconfigured than a channel device, and the flexibility of these devices makes them suitable for a wide variety of applications. Alkaline phosphatase was chosen as a model enzyme and used to convert fluorescein diphosphate into fluorescein. Droplets of alkaline phosphatase and fluorescein diphosphate were merged and mixed on the device, resulting in a 140-nL, stopped-flow reaction chamber in which the fluorescent product was detected by a fluorescence plate reader. Substrate quantitation was achieved with a linear range of 2 orders of magnitude and a detection limit of approximately 7.0 x 10-20 mol. Addition of a small amount of a nonionic surfactant to the reaction buffer was shown to reduce the adsorption of enzyme to the device surface and extend the lifetime of the device without affecting the enzyme activity. Analyses of the enzyme kinetics and the effects of inhibition with inorganic phosphate were performed, and Km and kcat values of 1.35 microM and 120 s-1, respectively, agreed with those obtained in a conventional 384-well plate under the same conditions (1.85 microM and 155 s-1). A phototype device was also developed to perform multiplexed enzyme analyses. It was concluded that the digital microfluidic format is able to perform detailed and reproducible assays of substrate concentrations and enzyme activity in much smaller reaction volumes and with higher sensitivity than conventional methods.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».