Cloning of 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A Reductase Gene from Vanda Mimi Palmer and Its Heterologous Expression in Escherichia coli
Notice bibliographique
Résumé
Plant 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA-reductase (HMGR) is involved in the conversion of HMG-CoA into mevalonate (MVA), which yields a biologically active isoprenoid precursor, isopentenyl pyrophosphate (IPP) unit. To date, heterologous expression of HMGR isolated from orchidaceae family has not been reported. The aims of this study were to isolate, clone, over-express and functionally characterize the cDNA encoding a 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA-reductase of Vanda Mimi Palmer (VMPHMGR) in Escherichia coli strain BL21 (DE3) pLysS. The deduced VMPHMGR contains an open reading frame (ORF) of 1689 bp and generates a protein of 562 amino acids with a calculated molecular mass of 59780 Da and a predicted pI value of 6.63, which is 76% identical to other plant HMGRs. Expression analysis of VMPHMGR transcript by real-time RT-PCR showed that it was differentially regulated. Primers with appropriate restriction sites were used to amplify and facilitate in-frame cloning of the VMPHMGR into pET32(a). The expression of VMPHMGR, in E. coli, fused to N-terminal thioredoxin (Trx·Tag), S·Tag and His·Tag fusion proteins in pET32(a) yielded a partially soluble recombinant protein. This expressed VMPHMGR was subjected to functional enzymatic assay and GCMS analysis of the end products detected dehydromevalonic lactone and pantolactone, which were derivatives of mevalonate lactone.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».