Irreversible thermal denaturation of cytochrome <i>c</i> studied by electrospray mass spectrometry
Notice bibliographique
Résumé
This work uses electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) in conjunction with hydrogen/deuterium exchange (HDX) and optical spectroscopy for characterizing the solution-phase properties of cytochrome c (cyt c) after heat exposure. Previous work demonstrated that heating results in irreversible denaturation for a subpopulation of proteins in the sample. However, that study did not investigate the physical reasons underlying this interesting effect. Here we report that the formation of oxidative modifications at elevated temperature plays a key role for the observed behavior. Tryptic digestion followed by tandem mass spectrometry is used to identify individual oxidation sites. Trp59 and Met80 are among the modified amino acids. In native cyt c both of these residues are buried deep within the protein structure, such that covalent modifications would be expected to be particularly disruptive. ESI-MS analysis after heat exposure results in a bimodal charge-state distribution. Oxidized protein appears predominantly in charge states around 11+, whereas a considerably lower degree of oxidation is observed for the 7+ and 8+ peaks. This finding confirms that different oxidation levels are associated with different solution-phase conformations. HDX measurements for different charge states are complicated by peak distortions arising from oxygen adduction. Nonetheless, comparison with simulated peak shapes clearly shows that the HDX properties are different for high- and low-charge states, confirming that interconversion between unfolded and folded conformers is blocked in solution. In addition to oxidation, partial aggregation upon heat exposure likely contributes to the formation of irreversibly denatured protein.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,002 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,002 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».