Uncovering methods for the prevention of protein aggregation and improvement of product quality in a transient expression system
Notice bibliographique
Résumé
Mammalian expression systems are used routinely for the production of recombinant proteins as therapeutic molecules as well as research tools. Transient expression has become increasingly popular in recent years due to its rapid timeline and improvements in expression level. While improvements to transient expression systems have focused mainly on the level of protein expression, the aspect of protein quality has received little attention. The removal of undesirable products, such as aggregation, depends primarily on purification, requiring additional cumbersome steps, which can lead to a lower product yield and longer timelines. In this study, we show that reducing the level of transcription by transfecting at a lower gene dose improves the quality of secreted molecules prone to aggregation. For gene dosing to have this effect, it is critical for the carrier DNA to be an empty vector containing the same elements as the gene containing plasmid. This approach can be used in combination with a temperature shift to hypothermic conditions during production to enhance the effect. The observed improvements not only minimized aggregation levels, but also generated products with overall superior quality, including more homogeneous signal peptide cleavage and N-linked glycosylation profiles. These techniques have produced a similar improvement in product quality with a variety of other molecules, suggesting that this may be a general approach to enhance product quality from transient expression systems.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».