Localization of PKA phosphorylation site, Ser2030, in the three-dimensional structure of cardiac ryanodine receptor
Notice bibliographique
Résumé
PKA (protein kinase A)-dependent phosphorylation of the cardiac Ca2+-release channel/RyR2 (type 2 ryanodine receptor)is believed to directly dissociate FKBP12.6 (12.6 kDa FK506-binding protein) from the channel, causing abnormal channel activation and Ca2+ release. To gain insight into the structural basis of the regulation of RyR2 by PKA, we determined the three-dimensional location of the PKA site Ser2030. GFP (green fluorescent protein) was inserted into RyR2-wt (wild-type RyR2)and RyR2 mutant, A4860G, after Thr2023. The resultant GFP-RyR2 fusion proteins, RyR2T2023-GFP and RyR2(A4860G)T2023-GFP, were expressed in HEK-293 (human embryonic kidney) cells and functionally characterized. Ca2+-release assays revealed that both GFP-RyR2 fusion proteins formed caffeine- and ryanodine-sensitive Ca2+-release channels. Further analyses using[3H]ryanodine binding demonstrated that the insertion of GFPinto RyR2-wt after Thr2023 reduced the sensitivity of the channelto activation by Ca2+ or caffeine. RyR2(A4860G)T2023-GFP was found to be structurally more stable than RyR2T2023-GFP and was subsequently used as a basis for three-dimensional reconstruction. Cryo-electronmicroscopy and single particle image processing of the purified RyR2(A4860G)T2023-GFP protein revealed the location of the inserted GFP, and hence the Ser2030 PKA site in domain 4,a region that may be involved in signal transduction between the transmembrane and cytoplasmic domains. Like the Ser2808 PKA site reported previously, the Ser2030 site is not located close to the FKBP12.6-binding site mapped previously, indicating that neither of these PKA sites is directly involved in FKBP12.6 binding. On the basis of the three-dimensional localizations of a number of residues or regions, a model for the subunit organization in the structure of RyR2 is proposed.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».