Binding of RPE65 Fragments to Lipid Monolayers and Identification of Its Partners by Glutathione <i>S</i>-Transferase Pull-Down Assays
Notice bibliographique
Résumé
RPE65 is the major component of the retinal pigment epithelium (RPE) microsomal membrane, and it plays a critical role in the binding of retinoids involved in the visual cycle. To understand how RPE65 binds to membranes, we have expressed and purified soluble fragments of human RPE65 fused to glutathione S-transferase (GST). The interaction between two fragments of RPE65 (F1 and F2 which include residues 1-125 and 126-250, respectively) and lipid monolayers has been studied by surface pressure, ellipsometry, and surface rheology measurements. Surface pressure and ellipsometry clearly showed a rapid adsorption of F2 to lipid monolayers whereas the kinetics of binding of F1 was much slower. Furthermore, the data suggest that the F2 fragment inserts into the lipid monolayer. Surface rheology showed a clear increase in monolayer rigidity only in the presence of F2, thereby demonstrating high intermolecular interactions of this fragment. This observation is further supported by the GST pull-down assays which demonstrated that F2 cosediments with full-length RPE65, suggesting that RPE65 has the propensity to form clusters or oligomers. The structure homology modeling of RPE65 based on a related family member, apocarotene 15',15'-oxygenase, further suggests that a hydrophobic patch located in the F2 region might be responsible for membrane binding. The present work shows that F2 interacts much stronger with lipid monolayers than does F1, which suggests that the region of RPE65 located between residues 126-250 should be very important for its membrane binding. Moreover, given that these fragments are not acylated, these data also suggest that an effective binding of RPE65 to membranes can be achieved without palmitoylation. Furthermore, GST pull-down assays also indicated that F2 interacts with 11-cis-retinol dehydrogenase, which supports previous data suggesting that it could act as a partner of RPE65.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».