Fluorescently-Labeled Estradiol Internalization and Membrane Trafficking in Live N-38 Neuronal Cells Visualized with Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy
Notice bibliographique
Résumé
Estradiol is a steroid hormone that binds and activates estradiol receptors.Activation of these receptors is known to modulate neuronal physiology and provide neuroprotection, but it is not completely understood how estradiol mediates these actions on the nervous system.Activation of a sub-population of estradiol receptor-α (ERα), originally identified as a nuclear protein, localizes to the plasma membrane and appears to be a critical step in neuroprotection against brain injury and disease.Previously we showed that estradiol stimulates the rapid and transient trafficking of plasma membrane ERα in primary hypothalamic neurons, and internalization of membrane-impermeant estradiol (E6BSA-FITC) into cortical neuron endosomes in vitro.These findings support the concept that estradiol activates and downregulates plasma membrane ERa by triggering endocytosis.Here, we use TIRFM (total internal reflection fluorescence microscopy) to image the trafficking of E6BSA-FITC, and GFP-labeled ERα, in live cells in real time.We show that activation of plasma membrane ERs by E6BSA-FITC result in internalization of the fluorescent ligand in live N-38 neurons, an immortalized hypothalamic cell line.Pretreatment with ER antagonist ICI 182,780 decreased the number of E6BSA-FITC labeled puncta observed.We also observed in live N-38 neurons that E6BSA-FITC co-localized with FM4-64 and LysoTracker fluorescent dyes that label endosomes and lysosomes.Our results provide further evidence that plasma membrane ERa activation results in endocytosis of the receptor.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».