The Use of Prothrombin(S525C) Labeled with Fluorescein to Directly Study the Inhibition of Prothrombinase by Antithrombin during Prothrombin Activation
Notice bibliographique
Résumé
Serine 525 of human prothrombin was mutated to cysteine and covalently labeled with fluorescein to make II(S525C)-fluorescein. Kinetics of cleavage of this derivative by prothrombinase are identical to those of wild-type prothrombin. Cleavage is coincident with a 50% increase in fluorescence intensity and the product is catalytically inactive. Thus, it allows convenient monitoring of prothrombin activation without generating active thrombin. The kinetics of inhibition of factor Xa (FXa) by antithrombin (AT) and AT-heparin were measured by monitoring activation of II(S525C)-fluorescein and the hydrolysis of the chromogenic substrate S2222 in the presence of AT. With S2222 as the substrate the rate constant for inhibition of FXa, Ca(2+), and unilamellar vesicles of phosphatidylcholine and phosphatidylserine (75:25) (PCPS) vesicles by AT was 3.51 x 10(3) m(-1) s(-1); when factor Va (FVa) was included the rate constant was 1.55 x 10(3) m(-1) s(-1). In the absence of FVa, II(S525C)-fluorescein had no effect on inhibition. When II(S525C)-fluorescein was the substrate, however, FVa at saturating concentrations profoundly protected FXa from inhibition by AT, increasing the half-life from 3 min with FXa, Ca(2+), PCPS, and II(S525C)-fluorescein, to greater than 69 min when FVa was included. Thus, both FVa and prothrombin are necessary for this level of protection. In the absence of prothrombin, FVa decreased the second order rate constant for inhibition by the AT-heparin complex from 1.58 x 10(7) m(-1) s(-1), for FXa, Ca(2+), and PCPS, to 7.72 x 10(6) m(-1) s(-1). II(S525C)-fluorescein and factor Va together reduced the rate constant to less than 1% of that for FXa, Ca(2+), and PCPS. At a heparin concentration of 0.2 unit/ml, this corresponds to a half-life increase from 1 s to 136 s.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».