Characterization of Calu-3 cell monolayers as a model of bronchial epithelial transport: organic cation interaction studies
Pourquoi ce travail est dans la base
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Notice bibliographique
Résumé
BACKGROUND: To fully exploit organic cation transporters for targeted drug delivery in the lung, the use of a readily available and well-characterized tissue culture model and cheap easily detectable substrates is indispensable. OBJECTIVES: To investigate the suitability of Calu-3 as tissue model for characterizing organic cation permeation across the bronchial cells using a fluorescent dye, 4-(4-(Dimethylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide (4-DI-1-ASP). METHODS: Substrate uptake, inhibition, and transport were performed to establish active transport mechanism. Organic cation transporter expression was determined with quantitative polymerase chain reaction (qPCR), immune-histochemistry, and fluorescent microscopy. RESULTS: 4-Di-1-ASP uptake in Calu-3 cells was concentration (K(m) = 2.7 ± 0.3 mM, V(max) = 4.6 ± 2.6 nmol/µg protein/30 min), temperature (uptake at 37°C>>4°C), and pH dependent (higher uptake at pH ≥ 7). L-carnitine, verapamil, and corticosterone significantly inhibited its uptake with IC(50) of 28.2, 0.81, and 0.12 mM, respectively. Transport of the dye across the cells was polarized (AP→BL transport was 2.5-fold > BL→AP), saturable (Km = 43.9 ± 3.2) (µM; Vmax =0.0228 ± nmol/cm(2)/sec) and reduced 3-fold by metabolic inhibition. The expression pattern of the organic cation transporters (OCT) and carnitine/organic cation transporter (OCTN) isoforms was: OCT1<<OCT3 <OCTN1<OCTN2; OCT2 was not detected. CONCLUSIONS: Based on qPCR, immunohistochemistry, uptake and transport data, the Calu-3 cells can be used as a model for not only studying strategies for optimizing the effect of inhaled organic cations, but also for cross-validating newly-developed respiratory cell lines.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
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