Purification and Characterization of WaaP from Escherichia coli, a Lipopolysaccharide Kinase Essential for Outer Membrane Stability
Notice bibliographique
Résumé
In Escherichia coli, Salmonella enterica, and Pseudomonas aeruginosa, the waaP (rfaP) gene product is required for the addition of phosphate to O-4 of the first heptose residue of the lipopolysaccharide (LPS) inner core region. This phosphate substitution is particularly important to the biology of these bacteria; it has previously been shown that WaaP is necessary for resistance to hydrophobic and polycationic antimicrobials in E. coli and that it is required for virulence in invasive strains of S. enterica. WaaP function is also known to be essential for the viability of P. aeruginosa. The predicted WaaP protein shows low levels of similarity (10-15% identity) to eukaryotic protein kinases, but its kinase activity has never been tested. Here we report the purification of WaaP and the reconstitution of its enzymatic activity in vitro. The purified enzyme catalyzes the incorporation of 33P from [gamma-33P]ATP into acceptor LPS purified from a defined E. coli waaP mutant. Enzymatic activity is dependent upon the presence of Mg2+ and is maximal from pH 8.0 to 9.0. The apparent Km (determined at saturating concentrations of the second substrate) is 0.13 mm for ATP and 76 microm for LPS. These data are the first proof that WaaP is indeed an LPS kinase. Further, site-directed mutagenesis of a predicted catalytic residue suggests that WaaP shares a common mechanism of action with eukaryotic protein kinases.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».