Adenovirus-mediated Cre deletion of floxed sequences in primary mouse cells is an efficient alternative for studies of gene deletion
Notice bibliographique
Résumé
This study evaluates the utility of Cre-expressing adenovirus for deletion of floxed genes in primary cells using primary murine hepatocytes. Adenovirus infection was very efficient, even at very low MOI (>95% infection at a MOI of 6) and did not reduce viability. High level LacZ expression was cytotoxic to hepatocytes but Cre expression had no effect on viability. Cre-mediated recombination was completed within a timespan that permits experimentation during primary culture (>95% recombination after 24 h), independently of the number of floxed alleles per cell. Recombination did not induce p53 or produce cytological nuclear abnormalities (even in polyploid cells). Contrary to expectation, deletion of DNA ligase 1 did not alter cell cycle progression, although Cre expression hastens entry to S phase from G(1), independently of the presence of floxed sequences. We conclude that adenovirus-mediated deletion of floxed alleles in primary cells is a straightforward and highly efficient tool for conducting preliminary studies of conditional gene targeting. Primary cells have advantages of differentiation, relative purity and ease of experimentation within controlled conditions, while avoiding confounding problems encountered in vivo (i.e. target cell specificity, kinetics and level of recombination, and elicitation of inflammatory and immune responses). This system could help identify important phenotypic effects and design and interpret in vivo studies.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».