Analysis of high-level S-layer protein secretion in<i>Caulobacter crescentus</i>
Notice bibliographique
Résumé
Caulobacter crescentus exhibits a hexagonally arranged protein layer on its outermost surface. RsaA, the sole protein of this "S-layer", is secreted by a type I (ABC) transporter. Few type I transporters show high-level secretion, and few bacterial S-layers have been carefully examined for the amount of protein synthesis capacity needed to maintain cell coverage. Here we determined RsaA levels by quantitative immunoblotting methods, learned that very stable mRNA is a key factor in high-level secretion, and found that the transporter was capable of still higher secretion. A propensity for RsaA to aggregate was a barrier to quantitation, but with the use of S-layer shedding mutants and methods to keep RsaA soluble, we learned that approximately 31% of cell protein is RsaA. When multiple copies of rsaA were introduced, the level increased to approximately 51% of cell protein, a higher level than we are aware of for any protein in any bacterium. Unexpectedly, in comparing normal and S-layer shedding strains, an assembled S-layer was not a significant barrier to elevated secretion. The rsaA mRNA half-life was determined by real-time PCR to be 36 min, ranking with the most stable known in bacteria. A modification of the 5' region resulted in a shorter half-life and a reduction in maximum protein synthesis levels. If secretion was prevented by knockout of type I transporter genes, RsaA levels dropped to 10% or less of normal, but with no significant reduction in rsaA mRNA. Overall, normal levels of RsaA were unexpectedly high, and still higher levels were not limited by transporter capability, the presence of an assembled S-layer, or the capacity of the cell's physiology to produce large amounts of one protein. The normal upper limit of RsaA production appears to be controlled only by the level of an unusually stable message. Significant down-regulation is possible and is accomplished posttranscriptionally.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».