Biochemical Characterization of UDP-Gal:GlcNAc-Pyrophosphate-Lipid β-1,4-Galactosyltransferase WfeD, a New Enzyme from<i>Shigella boydii</i>Type 14 That Catalyzes the Second Step in O-Antigen Repeating-Unit Synthesis
Notice bibliographique
Résumé
The O antigen is the outer part of the lipopolysaccharide (LPS) in the outer membrane of Gram-negative bacteria and contains many repeats of an oligosaccharide unit. It contributes to antigenic variability and is essential to the full function and virulence of bacteria. Shigella is a Gram-negative human pathogen that causes diarrhea in humans. The O antigen of Shigella boydii type 14 consists of repeating oligosaccharide units with the structure [→6-d-Galpα1→4-d-GlcpAβ1→6-d-Galpβ1→4-d-Galpβ1→4-d-GlcpNAcβ1→]n. The wfeD gene in the O-antigen gene cluster of Shigella boydii type 14 was proposed to encode a galactosyltransferase (GalT) involved in O-antigen synthesis. We confirmed here that the wfeD gene product is a β4-GalT that synthesizes the Galβ1-4GlcNAcα-R linkage. WfeD was expressed in Escherichia coli, and the activity was characterized by using UDP-[³H]Gal as the donor substrate as well as the synthetic acceptor substrate GlcNAcα-pyrophosphate-(CH₂)₁₁-O-phenyl. The enzyme product was analyzed by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS), high-performance liquid chromatography (HPLC), nuclear magnetic resonance (NMR), and galactosidase digestion. The enzyme was shown to be specific for the UDP-Gal donor substrate and required pyrophosphate in the acceptor substrate. Divalent metal ions such as Mn²(+), Ni²(+), and, surprisingly, also Pb²(+) enhanced the enzyme activity. Mutational analysis showed that the Glu101 residue within a DxD motif is essential for activity, possibly by forming the catalytic nucleophile. The Lys211 residue was also shown to be required for activity and may be involved in the binding of the negatively charged acceptor substrate. Our study revealed that the β4-GalT WfeD is a novel enzyme that has virtually no sequence similarity to mammalian β4-GalT, although it catalyzes a similar reaction.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».