Identification of a Lipoprotein Lipase Cofactor-binding Site by Chemical Cross-linking and Transfer of Apolipoprotein C-II-responsive Lipolysis from Lipoprotein Lipase to Hepatic Lipase
Notice bibliographique
Résumé
To localize the regions of lipoprotein lipase (LPL) that are responsive to activation by apoC-II, an apoC-II peptide fragment was cross-linked to bovine LPL. Following chemical hydrolysis and peptide separation, a specific fragment of LPL (residues 65-86) was identified to interact with apoC-II. The fragment contains regions of amino acid sequence dissimilarity compared with hepatic lipase (HL), a member of the same gene family that is not responsive to apoC-II. Using site-directed mutagenesis, two sets of chimeras were created in which the two regions of human LPL (residues 65-68 and 73-79) were exchanged with the corresponding human HL sequences. The chimeras consisted of an HL backbone with the suspected LPL regions replacing the corresponding HL sequences either individually (HLLPL-(65-68) and HLLPL-(73-79)) or together (HLLPLD). Similarly, LPL chimeras were created in which the candidate regions were replaced with the corresponding HL sequences (LPLHL-(77-80), LPLHL-(85-91), and LPLHLD). Using a synthetic triolein substrate, the lipase activity of the purified enzymes was measured in the presence and absence of apoC-II. Addition of apoC-II to HLLPL-(65-68) and HLLPL-(73-79) did not significantly alter their enzyme activity. However, the activity of HLLPLD increased approximately 5-fold in the presence of apoC-II compared with an increase in native LPL activity of approximately 11-fold. Addition of apoC-II to LPLHL-(77-80) resulted in approximately 10-fold activation, whereas only approximately 6- and approximately 4-fold activation of enzyme activity was observed in LPLHL-(85-91) and LPLHLD, respectively. In summary, our results have identified 11 amino acid residues in the N-terminal domain of LPL (residues 65-68 and 73-79) that appear to act cooperatively to enable substantial activation of human LPL by apoC-II.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».