Mg<sup>2+</sup>-free buffer elevates transformation efficiency of<i>Vibrio parahaemolyticus</i>by electroporation
Notice bibliographique
Résumé
AIMS: The ability to transform Vibrio spp. is limited by the extracellular nuclease that their cells secrete. The reported transformation efficiency of this organism is 10(2)-10(5) transformants per microgram DNA. We tried different buffers and conditions, aiming to elevate its transformation efficiency. METHODS AND RESULTS: MgCl(2) and sucrose are often included in the washing and/or electroporation buffers to stabilize the cell membrane. However, Mg(2+) is required for production and activity of the extracellular nuclease. A simple electroporation buffer lacking Mg(2+) was found to increase transformation efficiency dramatically, to levels 50-fold more than the buffers containing Mg(2+). To maintain the stability of the cell membranes, Mg(2+) was replaced with high concentrations of sucrose, from 272 to 408 mmol l(-1). With the new buffers, the transformation efficiency of Vibrio parahaemolyticus was increased to 2.2 x 10(6) transformants per microgram DNA. CONCLUSIONS: Mg(2+) in the buffer adversely affected transformation of V. parahaemolyticus by electroporation. The cell membranes of vibrio can be stabilized by high concentration of sucrose when Mg(2+) is absent. SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: A greater transformation efficiency can facilitate the genetic analysis of an organism and its pathogenicity. Buffers lacking Mg(2+) can be used for other nuclease-producing organisms.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
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