Phosphorylation by Alkaline Phosphatase: Immobilization and Synthetic Potential
Notice bibliographique
Résumé
Phosphatases (AP, E.C. 3.1.3.1) are hydrolytic enzymes that naturally hydrolyse phosphomonoesters but in a so-called transphosphorylation reaction these enzymes are also able to transfer a phosphate group from phosphorylated compounds to alcoholic functions. This transphosphorylation catalysed by acid phosphatases using pyrophosphate as a phosphate donor has been studied in some detail. However, the acidic pH optimum of these enzymes limits some of their applications. The catalytic features of alkaline phosphatase are similar to the acid phosphatases and its alkaline pH optimum suggests a possible application of this enzyme in phosphorylation reactions which need to be carried out at higher pH. Here we explore the synthetic potential of bovine intestine alkaline phosphatase (AP) in the phosphorylation of dihydroxyacetone (DHA) and glycerol using pyrophosphate (PPi) as phosphate donor. The phosphorylated compounds are intermediates in two multi-enzymatic cascade reactions for the synthesis of carbohydrates. The yields of dihydroxyacetone phosphate (DHAP) and glycerol-1-phosphate at pH 8 (2.6 mM and 2.2 mM, respectively) were comparable to the results obtained with the acid phosphatases at pH 4. Nevertheless, when the cascade reactions were carried out at pH 8, very low conversions were measured due to inactivation of the alkaline phosphatase by the product phosphate. To circumvent this inhibition, the alkaline phosphatase was immobilized on aldehyde-activated beads (Sepabeads EC-HA). The immobilization greatly diminished the inhibition by phosphate, and the immobilized alkaline phosphatase at pH 8 gave the same conversions in the cascade reaction starting from DHA as obtained with the acid phosphatase at pH 6. However, the immobilized enzyme was active for only one catalytic cycle and the beads could not be reused.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».